کلیگرآیرون آگار:
محیط کشت میکروبی کلیگر آیرون آگار KIA، یک محیط لوله ای شیب دار به رنگ قرمز -نارنجی است که برای نشان دادن توانایی تخمیر لاکتوز در خانواده انتروباکتریاسه (Enterobacteriaceae ) مانند سالمونلا و شیگلا بکار می رود.
اگر ارگانیسم نتواند گلوکز را تخمیر کند، رنگ محیط کشت تغییر نمیکند، این واکنش به تنهایی نشان می دهد که ازخانواده انتروباکتریاسه نیست. این محیط حاوی معرف فنل رد است؛ فنل رد در شرایط قلیایی قرمز و در شرایط اسیدی زرد می شود. باکتری با تخمیر قندهایی مثل گلوکز محیطی اسیدی ایجاد می کند.
با تغییر رنگ معرف pH ( فنل رد) در در واکنش با اسید تولید شده، گونه های باسیل های روده ای شناسایی می شوند. ترکیب سیترات آمونیم فریک و تیوسولفات سدیم، منجر به شناسایی تولید سولفید هیدروژن را می گردد.
محیط KIA مانند محیط TSI میباشد، با این تفاوت که 10 گرم ساکارز به TSI اضافه می شود.
کاربرد :
کلیگر آیرون آگارKIA
- بررسی توانایی باکتری در تخمیر قند گلوکز و لاکتوز
- تشخیص توانایی تولید گاز هیدروژن سولفید
ترکیب چهار مشتق پروتئین – عصاره گوشت گاو ، عصاره مخمر ، پپتون و پروتئوز پپتون سبب می شود که این محیط کشت از نظر غذایی بسیار غنی باشد. کمبود مهارکننده ها رشد همه گونه های باکتریایی به جز سخت رشدترین گونه ها را امکان پذیر می کند. گلوکز و لاکتوز منبع کربوهیدرات اند و به طور مساوی در قسمت شیب و انتهای (عمیق) لوله توزیع می شوند.
غلظت گلوکز در این محیط 0.1 %غلظت لاکتوز است. برخلاف TSI، در KIA ساکارز وجود ندارد. تیو سولفات سدیم منبع گوگرد است و سولفات آهن به عنوان ردیاب سولفید هیدروژن عمل می کند. اندیکاتور فنول رد زیر PH 6.8 به رنگ زرد است.
روش انجام آزمایش محیط کشت KIA
این محیط معمولا در لوله آزمایش به نحوی ریخته می شود که دارای سطح شیبدار (slant) و قسمت استوانه ای انتهایی یا باث (Butt) است. با آنس استریل مقداری از کلنی باکتری مجهول را به صورت مارپیچی روی تمام سطح شیب دار کشت می دهیم و سپس در عمق آگار تا فاصلهmm 5-3 عمق لوله، تلقیح می کنیم.
لوله ها را به مدت 24hو در صورت عدم واکنش تا 81h ، در دمای 35 درجه سانتی گراد در شرایط هوازی انکوبه می کنیم. بعد از انکوباسیون، نتیجه واکنش در سطح شیب دار و عمق از نظر تولید اسید، تولید گاز و تولید سولفید هیدروژن بررسی می کنیم.
نکات:
- هنگام بیرون آوردن نیدل از ته لوله، شکستگی در محیط جامد ایجاد نشود، زیرا ممکن است این ترک با تولید گاز توسط باکتری اشتباه شود.
- سر لوله باید شل باشد تا جریان هوا آزادانه عبور نماید.
- لوله ها پس از ۱۸ تا ۲۴ ساعت بررسی شوند، وگرنه ممکن است رنگ لوله ها عوض شود.
- در هر دو محیط TSI ،KIA مقدار محدودی گلوکز و دو برابر غلظت گلوکز از قندهای لاکتوز و سوکروز وجود دارد.
تولید گاز و سولفید هیدروژن
اگر باکتری در حین تخمیر، گاز CO2 تولید کند، باعث بروز شکستگی در محیط با ایجاد حباب می شود. گاهی مقدار گاز تولیدی زیاد است و محیط را به سمت بالا می راند. باکتری هایی که دارای آنزیم desulfurase می باشند، قادرند اسید آمینه های حاوی سولفور را مانند سیستئین و متیونین را دی سولفوره کرده و ایجاد گاز H2S نمایند که این گاز در اثر ترکیب با آهن موجود در محیط ایجاد رسوب سیاه رنگ FeS می نماید. بنابراین هرکجا در این لوله سیاهی دیده شود، نشان دهنده به وجود آمدن گاز H2S می باشد.
انتخابهای مرتبط
محصولات مشابه
